蝗蟲(chóng)基因組DNA提取及保存方法

1.供試?yán)ハx(chóng)本試驗(yàn)研究的昆蟲(chóng)樣本為亞洲小車蝗(Oedaleusasiaticus)成蟲(chóng)，均采自內(nèi)蒙古錫林郭勒盟多倫縣農(nóng)牧交錯(cuò)區(qū)草原，用養(yǎng)蟲(chóng)籠活體帶回實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行處理保存.液氮罐

2.液氮速凍處理取10頭活的亞洲小車蝗單頭裝入離心管中，將離心管放入液氮中速凍處理3min，取出后在室溫條件下放置12h觀察亞洲小車蝗存活情況。

3.樣本保存方法

(1)液氮速凍后保存將采集帶回實(shí)驗(yàn)室的活體蝗蟲(chóng)樣本單頭裝入離心管中，將離心管放入液氮中速凍處理3min，取出后放入-40℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

(2)直接冷凍保存將采集帶回實(shí)驗(yàn)室的活體蝗蟲(chóng)樣本單頭裝入離心管中，直接放入-40℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

(3)乙醇保存將采集帶回實(shí)驗(yàn)室的活體蝗蟲(chóng)樣本放入無(wú)水乙醇(分析純)中保存?zhèn)溆谩?/p>

(4)干制標(biāo)本 將采集帶回來(lái)的活體亞洲小車蝗樣本放入毒瓶中毒死后，針插保存于標(biāo)本室中，待風(fēng)干后進(jìn)行DNA提取試驗(yàn)。

4.DNA的提取將上述4種方法保存的蝗蟲(chóng)樣本在3個(gè)月后進(jìn)行DNA提取試驗(yàn)。分別選用單頭亞洲小車蝗的后足股節(jié)，無(wú)水乙醇(分析純)保存的蝗蟲(chóng)后足股節(jié)需在提取之前先用無(wú)菌去離子水沖洗2～3次，將蝗蟲(chóng)股節(jié)放入研缽中用液氮研磨成粉并移入1.5mL離心管中，然后使用天根dp304動(dòng)物基因組DNA提取試劑盒參照說(shuō)明書(shū)步驟進(jìn)行基因組DNA提取。

5.DNA電泳檢測(cè)用1%的瓊脂糖凝膠電泳對(duì)提取的蝗蟲(chóng)基因組DNA進(jìn)行檢測(cè)。取DNA樣品3μL、上樣緩沖液2μL混勻后加入凝膠時(shí)預(yù)留的點(diǎn)樣孔中，加入DL2000Marker(TaKaRa;第3條帶為150ng/μL)，經(jīng)過(guò)100V恒壓電泳20min，使用紫外凝膠成像系統(tǒng)觀察基因組DNA提取情況并拍照保存。液氮罐